シングルセルウェスタン
Milo™は世界初のシングルセルウェスタンプラットフォームです。1回の泳動で数千個のシングルセルのタンパク質発現を測定できるため、サンプルの不均一性を詳細にプロファイリングできます。細胞懸濁液をセットするだけで、scWestチップが約1,000個のシングルセルを捕捉します。その後、Miloはチップ上で各シングルセルライセートをわずか1分間でSDS-PAGEにより分離します。さらに、お手持ちの従来のウェスタンブロット抗体でプローブするだけで、さまざまなマルチプレックス戦略を使い、1細胞あたり最大約12種類のタンパク質を測定できます。シングルセルウェスタンを活用することで、シングルセルレベルでのプロテオーム解析が可能となり、他のどのシングルセル技術よりも多くのプロテオーム情報を取得できます。
Miloを用いたシングルセルウェスタン
集団レベルでのタンパク質発現測定では、個々の細胞間の発現差や細胞サブポピュレーションの存在を見逃してしまうことがあります。Miloは、ウェスタンブロッティングの強みや応用力を活かしながら、シングルセル解析を可能にします。標的タンパク質の発現の不均一性を明らかにし、従来のウェスタンブロッティングでは見えなかった細胞サブポピュレーションを可視化し、またリン酸化フロー研究を簡素化したり、シングルセルRNA-seqデータをタンパク質レベルで検証することができます。
複雑なサンプルの異質性をプロファイリングしたい？
Miloは4時間で約1,000個のシングルセルにおけるタンパク質発現を測定できます。そのため、ターゲットタンパク質の異質性とサンプル内に占めるターゲット陽性細胞の割合を定量的に評価できます。
シングルセルRNA-seqデータをタンパク質レベルで検証したい？
従来のウェスタンブロット抗体を用いて、シングルセルRNA-seqデータをシングルセル タンパク質データで検証できます。さらに、scWestチップは使用後最大9ヶ月間保存できるため、シーケンス結果が揃ってから目的のターゲットをプローブすることが可能です。
シングルセルレベルで複数タンパク質を多重検出したい？
蛍光波長の異なる二次抗体による検出と、分子量の違いを用いて、シングルセルレベルで12種類以上のタンパク質を同時に検出します。scWestチップは最大9回までストリッピング＆リプロービングが可能なため、より高度なマルチプレックス研究も可能です!
簡単にリン酸化タンパク質のシグナル伝達解析（phospho-flow）をしたい？
フローサイトメトリー/FACSで必要な固定・透過化ステップは不要です！Miloは、scWestチップに捕捉した細胞を分析前に化学的に溶解するため、フローサイトメトリーよりも容易に細胞内や核内コンパートメントにアクセスできます。細胞を溶解することで、Miloは転写因子やメチル化ヒストンなど、検出が困難なタンパク質も測定可能です。また、Miloの分子量分離ステップを用いることで、リン酸化特異的抗体で起こりやすい非特異的結合を分離することも可能です。フローサイトメトリーではこれらは識別できません。
フローサイトメトリーで使える抗体が無いタンパク質を検出したい？
Miloはオープンプラットフォームなので、フローサイトメトリー/FACS用抗体より10～100倍も多い市販のウェスタンブロッティング用抗体カタログを活用できます。目的の標的に対するフローサイトメトリー抗体がなく、分析できないといった課題を解消します。
タンパク質アイソフォームの異質性を測定したい？
Miloの分子量分離ステップは、分子量の異なるタンパク質アイソフォームを分離できるため、サンプル中でどの細胞が一方のアイソフォームを発現しているのか、もう一方を発現しているのか、または両方を発現しているかをシングルセルレベルで測定できます。フローサイトメトリーでは困難です!
低効率の遺伝子編集システムにおける遺伝子編集の効率や効果を評価したい？
Miloは、編集効率が低い場合であっても、サンプル中で挿入遺伝子を発現している細胞の割合を定量できます。さらに、編集された遺伝子と下流の効果マーカーを同時に測定することで、遺伝子編集が編集細胞に与える影響をシングルセルレベルで理解できます。
細胞数の少ないサンプルでタンパク質発現を測定したい？
Miloは約1万個のシングルセルからなるサンプルでも分析可能です。そのため、タンパク質発現を調べるために数百万個の細胞を集める必要はありません。捕捉される細胞数はロードする細胞数に応じて増減するため、より希少なサンプルの解析も可能です。またMiloは他の手法では分析できないほど細胞数が少ない、FACSで選別された高濃度細胞集団の特性評価にも対応します。
シングルセルウェスタンのユーザーの声
「あるタンパク質の2つの異なるアイソフォームを調べていましたが、各細胞でどちらか一方だけを発現しているのか、両方を発現しているのかを知ることが重要でした。Miloが登場するまでは、それを把握するのは大変でした。さらに、Miloを使うことで、組織生検でもこのタンパク質の発現を確認でき、より具体的で役立つ情報も得られるようになりました。」
Prashant Gets a Better Picture of Taxane Resistance at the Single-Cell Level with Milo
Prashant Vijay Thakkar, Ph.D., Postdoctoral associate, Department of Medicine, Weill Cornell Medicine
「Miloを使うことで、シングルセルレベルでタンパク質を解析でき、集団内の転移細胞の多様性を把握できました。」
Dr. Zhong & Colleagues Understand Heterogeneity in Metastatic Cell Populations with Milo
Yi Zhong, M.D., Ph.D., Research Associate, Memorial Sloan Kettering Cancer Center
「シングルセルリアルタイムqPCRのデータとMilo組み合わせて使っています。RNAデータから転写産物が確認できており、Miloで結果を確認すると同時に、各細胞内のタンパク質量も定量化できました。」
Guts and Glory: Validating a Neuroepithelial Circuit using Milo
M. Maya Kaelberer, Ph.D., Postdoctoral Associate, Duke University School of Medicine
「Miloを使うことで、精製した腸幹細胞の各細胞のタンパク質発現を、従来のウェスタンブロットでは捉えられなかったレベルで観察できました。」
Milo Goes Keto: Conquering Analysis of Scarce Intestinal Stem Cell Populations
Chia-Wei Cheng, Ph.D., Postdoctoral Fellow, Koch Institute for Integrative Cancer Research, MIT
ガンおよび免疫腫瘍学
次世代ウェスタンブロッティングツールを活用してガンおよび免疫腫瘍学の研究を進化させ、サンプルの理解をより深めましょう。
SARS-CoV-2
自動化シンプルウェスタンシステムを活用してラボ時間を短縮し、COVID-19研究を加速させましょう。セットアップ後は装置に任せ、わずか3時間でリモートからデータを確認しましょう!
細胞および遺伝子治療
次世代分析機器で細胞および遺伝子治療のワークフローを効率化し、さらなるスピード向上を実現しましょう。
標的タンパク質分解
ハイスループット・ハンズフリーのシンプルウェスタンシステムの定量解析で、スクリーニング研究を効率化しましょう。
SARS-CoV-2血清学
わずか3時間で、5つの主要なウイルス抗原に対する血清や血漿中のヒトIgG抗体を定量的に評価しましょう。
エクソソーム
エクソソーム分離と高感度ウェスタンブロッティングのリーダーによる、細胞外小胞サンプルのタンパク質分析の検証済みワークフロー。
| 特長 | 説明 |
|---|---|
| システム要件および互換性 | |
| サンプルタイプ | >10,000細胞を含む細胞懸濁液 |
| 細胞径 | 懸濁液中において7-25 µm |
| 対応細胞 | 哺乳類細胞; 懸濁状態で球状、未固定 |
| 抗体の要件 | 標準的な非標識一次抗体および蛍光標識二次抗体 |
| その他必要な機器 | 汎用蛍光マイクロアレイスキャナー（分解能5 µm以上対応） |
| 性能と仕様 | |
| 一般的な細胞希釈条件 | scWestチップ1枚あたり約1,000～2,000細胞の捕捉および分析が可能 |
| 分子量範囲 | 15-175 kDa |
| 分子量解像度 | 異なる波長チャネルでは>10%、同一波長チャネルでは>30% |
| ターゲットマルチプレックス | 蛍光色と分子量の違いを組み合わせることで、1細胞あたり最大4種類のタンパク質を同時に測定可能。ストリッピングとリプロービングで12タンパク質以上 |
| ワークフロー時間 | 4-6時間 |
Miloの製品資料
Bio-Techne.comでの日本語ページをご覧ください