ウェスタンブロットのストリップとリプローブを拡張する、JessとAbbyの全自動RePlex

RePlex - ウェスタンブロットのストリップとリプローブに代わる新しい選択肢

RePlexは2ステップで行うイムノアッセイです。1回目のプロービング（プローブ1）後に抗体を除去し、次に用いる抗体（プローブ2）で2回目のプロービングを行います。プローブ1とプローブ2の間でも、シグナル強度と再現性が損なわれることはありません。Simple WesternのRePlex機能により、ウェスタンブロットのストリッピングやリプロービングは不要になります！

免疫プロービングサイクル間で高い再現性を維持

Compass for Simple Western™のレーン表示では、RePlexの各プロービングサイクル間において、AKT1およびAKT2で同等のバンド強度およびピーク面積を示しています。

RePlexのプロービング順を選択

RePlexアッセイにおいて、プローブ1またはプローブ2で検出されたMCF7ライセート中のAKT1およびAKT2は、各タンパク質が免疫検出された順番に依存することなく優れた再現性を示し、RePlexの両プロービングサイクルで同等のシグナル強度を示しました。 さらに、RePlexアッセイにおける抗体除去後も、タンパク質の完全性とリプロービング性能は維持されます。

プロービングサイクル間における効率的な抗体除去

サンプルはキャピラリー内壁に共有結合して固定されているため、RePlexではサイクル間で抗体を完全かつ高い再現性で除去し、シグナル強度を維持することができます。Compass for Simple Westernのレーン表示では、JurkatおよびMCF7細胞株における複数のターゲットタンパク質について、Probe 1では明確なイムノアッセイシグナルが検出され、Probe1に由来する残存シグナルはほとんど認められませんでした。

同一キャピラリー内でのイムノアッセイと総タンパク質検出

RePlexでは、2サイクル目を総タンパク質検出専用として使用できるため、信頼性の高いノーマライゼーションが可能です。 JessとAbbyでは、RePlexのすべてのステップは自動で行われ、一つのサンプルからより多くのデータを得ることができ、試薬と消耗品のコストを削減します。

全自動の総タンパク質ノーマライゼーション

本図は、未処理のMCF7ライセートおよびh-IGF1で活性化されたMCF7ライセートにおけるAKTのリン酸化を示しています。 (A-B) Probe 1ではリン酸化AKTおよびpan AKTをそれぞれ化学発光および近赤外蛍光で検出し、Probe 2では総タンパク質シグナルを検出しました。 (C) Compass for Simple WesternのPeak Tableでは、リン酸化およびpan AKTシグナルを総タンパク質シグナルに対してノーマライズし、ターゲットタンパク質の発現を定量しました。