Simple Westernによる総タンパク質ノーマライゼーション（Total Protein Assay）

ウェスタンブロッティングにおけるノーマライゼーションは、定量精度に大きく影響します。近年では、GAPDHやチューブリンなどのハウスキーピングタンパク質に依存する方法ではなく、総タンパク質（Total Protein）によるノーマライゼーションが推奨されています。

従来のウェスタンブロットでは、標的タンパク質のシグナル補正にハウスキーピングタンパク質が広く用いられてきました。しかし、これらのタンパク質は条件によって発現量が変動することが知られており、単一タンパク質による標準化は必ずしも適切とは言えません。そのため、メンブレン上またはキャピラリー内の全タンパク質を対象とした、より包括的なノーマライゼーションが求められています。

実際に、近年の科学雑誌の投稿ガイドラインでは、発現変化をより正確に反映する手法として、総タンパク質によるノーマライゼーションが推奨されています。従来法では、CBB染色やポンソーS染色を用いてメンブレン上の総タンパク質を可視化し、レーンごとに補正値を算出する必要がありましたが、追加の手作業やばらつきが課題でした。

本ガイドでは、Simple WesternのTotal Protein Detection Module（DM-TP01）を用いて、イムノアッセイと総タンパク質アッセイを同時に測定する方法を紹介します。このアプローチにより、追加測定を行うことなく、ハイスループットかつ高再現性でノーマライゼーション係数を取得でき、論文投稿や定量解析に求められる精度を効率的に実現できます。