Milo

シングルセルウェスタン

Milo™ は世界初のシングルセルウェスタン プラットフォームです。1回の泳動で数千個のシングルセルにおけるタンパク質発現測定を行えるため、サンプルの不均一性をプロファイリングできます。細胞懸濁液をセットするだけで、scWest チップが約1,000個のシングルセルを捕捉します。その後、Milo はチップ上で各シングルセルライセートを1分間と僅かな時間で SDS-PAGE にて分離します。その後、お好みの従来のウェスタンブロット抗体でプローブするだけで、様々なマルチプレックス戦略を用いて細胞あたり約12種類のタンパク質を測定できます。シングルセルウェスタンを用いることで、シングルセルプロテオーム解明が可能となり、他のどのシングルセル技術よりも多くのプロテオームを測定できます。

複雑なサンプルの異質性をプロファイリングする必要があります

Milo は 4 時間の実験で約1,000個のシングルセルにおけるタンパク質発現を測定するため、ターゲット発現の異質性とサンプル内のターゲット陽性細胞の割合を定量化できます。

シングルセルRNA-seqデータのタンパク質検証が必要です

従来のウェスタンブロット抗体を用いて、シングルセル RNA-seq データをシングルセル タンパク質データで検証できます。さらに、scWest チップは使用後最大9ヶ月間保存できるため、目的のターゲットをプローブする前に、十分な時間でシーケンス結果を得ることができます。

シングルセルレベルで複数のタンパク質を検出するには多重化が必要です

蛍光波長スペクトルと分子量に基づいたマルチプレックス戦略を用いて、サンプル中の12種類以上のタンパク質を単一細胞レベルで同時に検出します。scWest チップは最大9回までストリップ＆リプローブを行えるため、より高度なマルチプレックス研究も可能です!

リン酸化フロー シグナル伝達研究を簡素化する必要がある

フローサイトメトリー/FACS の固定および透過化ステップが不要になります！Milo はscWest チップに捕捉された細胞を分析前に化学的に溶解することで、フローサイトメトリーよりも容易に細胞内および核内コンパートメントにアクセスします。細胞を溶解することで、Milo は転写因子やメチル化ヒストンといった検出困難なタンパク質も検出できます。また、Milo での分子量分離を使用することで、リン酸化特異的抗体で多く見られ、フローサイトメトリーでは分離できない非特異的結合を分離することも可能です。

フローサイトメトリーに適した抗体が無いタンパク質を検出する必要があります

Milo はオープンプラットフォームなので、フローサイトメトリー/FACS カタログの10～100倍にも及ぶ、市販のウェスタンブロッティング用抗体の膨大なカタログを利用できます。目的の標的に対するフローサイトメトリー抗体が見つからないという状況に、もう悩まされることはありません。

タンパク質アイソフォームの異質性を測定したい

Milo の分子量分離は、分子量の異なるタンパク質アイソフォームを分離できるため、サンプル中の細胞が1つのアイソフォーム、もう1つのアイソフォーム、または両方のアイソフォームを発現しているかを測定できます。フローサイトメーターと合わせてお試しください!

低効率遺伝子編集システムにおける遺伝子編集の効率や効果を測定する必要がある

Milo は低効率システムであっても、サンプル中の挿入遺伝子を発現する細胞の割合を定量化できます。さらに、編集された遺伝子と下流効果マーカーを同時に測定することで、編集された細胞に対する遺伝子の影響を理解することができます。

少量サンプル中のタンパク質発現を測定する必要がある

Milo は約1万個のシングルセルを含むサンプルも解析できるため、タンパク質発現解析のために数百万個もの細胞を収集する必要がなくなりました。捕捉される細胞数はロードする細胞数に応じて変化するため、より低濃度のサンプルも解析可能です。またMiloは、他の手法では解析できないほど細胞数が少ない、FACS で選別された高濃度細胞集団の特性評価も可能です。

「私はあるタンパク質における2つの異なるアイソフォームを観察していましたが、細胞がどちらか一方だけを発現しているのか、それとも特定の細胞で両方を発現しているのかを知ることが重要でした。Milo が登場するまで、これは難しい問題でした。Milo のおかげで、組織生検でこのタンパク質の発現を調べることができるようになり、より関連性の高い情報も得られるようになりました。」

Prashant Gets a Better Picture of Taxane Resistance at the Single-Cell Level with Milo

Prashant Vijay Thakkar, Ph.D., Postdoctoral associate, Department of Medicine, Weill Cornell Medicine

「Milo はシングルセルレベルでのタンパク質の研究を可能にし、集団内における転移細胞間の異質性を理解するのに役立ちます。」

Dr. Zhong & Colleagues Understand Heterogeneity in Metastatic Cell Populations with Milo

Yi Zhong, M.D., Ph.D., Research Associate, Memorial Sloan Kettering Cancer Center

「私たちは Milo をシングルセル リアルタイム qPCR データと組み合わせてきました。RNA は取得済みで、転写産物が存在することも分かっています。Milo を用いて結果を確認し、個々の細胞に含まれるタンパク質の量を定量化しました。」

Guts and Glory: Validating a Neuroepithelial Circuit using Milo

M. Maya Kaelberer, Ph.D., Postdoctoral Associate, Duke University School of Medicine

「Milo は従来のウェスタンブロッティングで不可能だった、精製された腸の幹細胞集団におけるシングルセルでのタンパク質発現の異質性のレベルを観察できました。」

Milo Goes Keto: Conquering Analysis of Scarce Intestinal Stem Cell Populations

Chia-Wei Cheng, Ph.D., Postdoctoral Fellow, Koch Institute for Integrative Cancer Research, MIT