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二抗是什么

Secondary antibodies bind to the immunoglobulin (Ig) domain of the primary antibody and are species and isotype specific.

二抗作为一种实用工具,可以帮助提高各种实验方法的有效性,这些实验包括 Western blot、免疫组化 (IHC)、流式细胞术和酶联免疫吸附测定法。二抗由携带其他物种抗体的免疫宿主动物产生。产生的抗体可以识别免疫一抗的免疫球蛋白 (Ig) 结构域并与之结合,并在纯化、分选和检测靶抗原时提供帮助。二抗通常与标签偶联。下游应用将确定二抗的标签偶联状态和选择。

选择二抗

根据几种不同的因素选择二抗。由于二抗需要识别一抗并与之结合,因此二抗需要对一抗的宿主物种和同型抗体(例如 IgG 或 IgM )具有特异性。此外,二抗应与最适合其应用的标签偶联。例如,Western blot 和 IHC 可以使用与显色或荧光分子偶联的二抗,而流式细胞术通常使用荧光标记的二抗。

Bio-Techne primary and secondary antibodies were used to detect CD32/PECAM-1 in the bEND.3 mouse endothelioma cell line by WB.

通过 Western blot 法检测 bEND.3 小鼠内皮瘤细胞系中的 CD31/PECAM-1。

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使用二抗的优势

Bio-Techne primary and secondary antibodies were used to detect ACE-2 and CD14 in human PBMCs by flow cytometry.
通过流式细胞术检测人体 PBMC 中的 ACE-2 和 CD14。

与仅使用偶联一抗直接检测蛋白质相比,使用一抗和二抗组合间接检测目标分析物具备多种优势。

•  放大信号

多个二抗可结合到一个一抗,每个结合的二抗会与报道分子偶联,从而增强信号并提高检测灵敏度。在有些检测中,可使用生物素化的二抗和链霉亲和素偶联的报道分子来进一步增强信号。

• 允许进行多重检测实验

由于二抗具有物种特异性,因此可以将实验设计为使用源自不同物种的一抗来检测多种分析物。使用与具有不同波长发射光的荧光染料偶联的二抗来检测不同的分析物。

• 保留互补位

一抗与报道分子的偶联,有可能会影响其抗原结合位点,也称为互补位。这将降低一抗与其靶抗原结合的能力。使用偶联的二抗后,实验人员可以在其检测中使用未偶联的一抗。

Novus Biologicals 二抗

Novus Biologicals 是 Bio-Techne 品牌,提供大量用于各种应用的优化二抗产品组合。

Novus Biologicals offers secondary antibodies for 26 reactive species with over 40 different labels validated for WB, ICC, IHC, flow cytometry and ELISA.

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